猪冷冻精液的研究从20世纪六七十年代开始，于国外研究机构领先开展，目前已成熟应用于种质资源的保留和远距离运输。在中国大力普及推广猪人工授精技术的过去10年中，养猪业发达国家关于冷冻精液的研究始终处于领先地位，最近3年，我国养猪大型企业，例如温氏集团、广西扬翔在此方面也投入大量精力，进行很好的尝试，效果显著。在第九届全国猪人工授精关键技术研讨会上，邀请了三位中外专家就冷冻精液的制作使用进行了全面到位的阐释，同时，百钧达科技发展（北京）有限公司携带自主研发的解冻精子活率高达80%以上的技术进行现场演示，将会议气氛推向高潮。
 
 


倪和民/教授
北京农学院倪和民
   猪冷冻精液研究与应用进展

　　猪精液冷冻保存的优势体现在，延长种公猪使用年限；获得更大的遗传进展；取代活体公猪的引进；优质种质资源跨地区相互整合；减少杂质、细菌污染，提高精液品质；缩小种猪场养殖规模，降低生产成本等。
　　猪精液常见冷冻剂型包含平胶袋、铝袋，颗粒冻精，0.25 mL细管，5 mL 大管，每一种都各有利弊。
　　通过比较BTS、Schonow、葡-柠-EDTA和ZO四种稀释剂发现，ZO液在17℃条件下保存的精子，具有较高的活力。
　　通过研究冷冻保护剂发现，甘油浓度为5%的精子活力最好；用乙二醇作为冷冻保护剂时，3%的乙二醇浓度冷冻精液效果要优于5%和7%的乙二醇浓度；在精液冷冻过程中，采用DMSO作为冷冻保护剂时，冷冻精液的效果均很不理想；甘油和乙二醇联合使用时，甘油5%+乙二醇1%组冷冻效果在质膜完整率、顶体完整率、畸形率方面性能优良；采用211g/min离心时，解冻后精子活力为0.31，优于800g/min和2400g/min；采用一次稀释法，解冻后精液活力、质膜完整率和顶体完整率均优于二次稀释法；猪精子密度为0.5×109个/mL时，冷冻效果较好；平衡时间为2 h，猪精液品质最好；采用-120℃平衡10min，解冻后精子活力为0.36，质膜完整率和顶体完整率较好；采用37℃ 30s方法解冻，精子活力、质膜完整率、顶体完整率最好，畸形率最低。在37℃ 30s水浴解冻方法更为适合0.25mL细管猪冻精解冻；肝素上游法诱发的B型精子率最高，与对照组、钙离子载体诱导法和咖啡因诱导法存在显著差异；孵育40min，B型精子率最高；孵育120min，AR型精子率最高，孵育40min诱发AR型最低。
　　采用冷冻皮特兰种公猪精液给30头母猪输精后，有24头母猪两个情期未返情，妊娠率达80%，平均产仔8.4头；采用3000rpm，10min离心，解冻后精液品质最好；平衡2～3h可提高精子的抗冷打击能力，同时冷冻保护剂可与精子充分接触达到冷冻保护效果；始冻温度为-150 ℃组解冻后精液品质最好；始冻温度低于-150 ℃时各项指标有下降趋势，说明冷冻速率并不是越快越好；采用40℃，40s水浴解冻，解冻后精液各项指标最好；精子密度为1.2×109个/ml时，解冻后精液品质最好；冷冻稀释液中添加3%甘油冻后精液品质最好。
　　在3个种猪场人工授精母猪共36头，同一情期连续两次人工授精，妊娠率达到66%以上，平均窝产子数这说明本试验得到的5ml细管猪精液冷冻方法具有一定的实用性，但妊娠率低于0.25ml细管冷冻精液。
　　猪的精液冷冻技术还存在许多问题, 但猪精液冷冻技术在试验研究、物种保存、杂交育种和扩大繁殖等实践中,依然具有很广阔的应用和发展前景，同时与牛冷冻精液高度商业化相比，猪冻精技术尚处初级阶段，市场应用前景广阔。
 
 


GUYDELHOMME/技术专家
法国IMV（卡苏）公司
   猪冷冻精液生产制作流程

　　目前，全球猪鲜精配种使用率≥99.5%，冻精配种使用率只有不到0.5%，但因为冻精使得精液保存和运输不再受稀释剂因素制约，促进了优秀种猪基因的国际传播，让高品质基因系的保存更简便，建立遗传多样性/遗传资源生物样本库。同时，使用冻精能有助于将来进行系谱检测和种猪选择，可用于配种优秀的和情期不规律且不可预知的后备母猪。所以，冷冻精液技术的研究推广还是大有意义的。
　　在精液使用前，需要对其进行安全卫生评估，为了有效使用冻精，精液冷冻、解冻和配种技术必须简易但精确，这是确保受胎率和窝产仔数接近于鲜精操作结果的唯一途径。
　　猪冷冻精液的生产制作流程大致分为公猪筛选、采精及检测、配制稀释液、制作冻精四个过程，使用时要先解冻再输精。
　　用于生产猪冷冻精液的精子应符合如下要求：活力不低于85%，正常精子不低于85%，活率不低于90%，顶体完整率不低于90%。稀释液配制过程中，稀释用水必须是无热原水、双蒸水或同等品质的实验室用水，需使用合适的消毒过的玻璃器皿和磁力加热搅拌器配制。鲜精稀释后，猪精液冷冻步骤为：离心、冷却、冷冻、冻精保存。猪冻精解冻操作需小心谨慎，输精前需使用CASA系统检测精子活力和形态，解冻后的精液在1h内用于输精，采用子宫内输精可有效提高受胎率和产仔数。
 
 


李兆华/研究员
吉林省农科院畜牧所
   猪冷冻精液的应用研究

　　我国从50年代初期开始对猪精液冷冻技术进行探索，近几年，包括中国农业大学等多家科研单位及百钧达科技发展（北京）有限公司、温氏集团等企业都在进行猪冷冻精液的研究。其中，百钧达科技发展（北京）有限公司取得猪冷冻精液技术的重大进展。解冻后使用只能容下单层精子活动空间的专用精子计数板在显微镜同一焦距视野下，精子活力已经达到80%以上，38℃条件下可存活5～6小时，通过对近一年冷配母猪进行统计，发情正常健康的母猪情期受胎率胎率达88.5%，平均产仔数11.2头，已经达到常温液态精液的繁育水平。
　　目前，猪冷冻精液应用的研究集中于冷冻技术，即冷冻稀释液配方的研究，稀释液主要成份为营养剂、抗冷冻保护剂，此外还有各种抗氧化成分、抗生素、调节渗透压、酸碱平衡的物质等。
　　冻精的承载工具目前有颗粒、0.25/0.5/5ml规格细管、5ml扁平塑料袋。冻精在输精时多使用深部输精技术，如输卵管输精法、子宫角输精法和子宫体输精法。深部输精要求环境安静放松、无需刺激，其掌握程度也对影响冻精的受胎率有很大作用。
 
　　俗话说“眼见为实”，为了让会议代表深刻理解并相信百钧达公司在猪冷冻精液技术方面的突破，公司特将冻精解冻的现场“搬”到了会场。在现场的冷冻精液的解冻及活力演示中，代表们表现出惊喜和欢迎，簇拥着演示者，生怕漏掉任何一个细节，期待亲眼见证解冻冻精高达76%-85%的活率。
 
 
搬到现场的全套解冻设备
  
取出冻精
 
解冻
  
镜检
 
会场LED公布解冻后精子活力
  
参会代表将演示台围得水泄不通
 
大家期待结果发布
  
百钧达梁旭东总经理进行同步解说
 
　　诚如报告专家介绍的，目前全球冷冻精液配种使用率只有不到0.5%，但凭借其在保种、存种、运输上的便利与可持久性，冷冻精液技术的研究和推广只会更加深入。加之如果百钧达公司研发的，可使冻精使用效率达到鲜精水平的类似技术得到商业化应用，那么冷冻精液技术对于优秀遗传物质利用和种公猪饲养成本降低而言，对国内乃至世界的养猪行业发展都将是大有裨益。